c18色譜柱利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機溶劑的水溶液為流動相，根據(jù)溶質(zhì)極性（疏水性）的差別進行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。

 

　　在硅膠基質(zhì)的反相填料中，以鍵合有C18、C8、C2的球形多孔填料為常見，用途廣。通過鍵合CN鍵，改變反相介質(zhì)極性，就變成了正相色譜。

 

　　c18色譜柱固定相穩(wěn)定，應用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動相的PH值小于2時，會導致鍵合相的水解；當PH值大于7時硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。

 

　　c18色譜柱的影響因素：

 

　　1、柱長

 

　　有機小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加。但是柱長增加并不能使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加。它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。

 

　　2、流動相的流速

 

　　有機小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。而蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小，柱子越長，色譜峰的寬度就越大，分辨率就越小。制備色譜上樣過程中的流速對動態(tài)吸附容量影響很大。

 

　　3、溫度

 

　　溫度上升，流動相黏度下降，流動速度加快，且流動相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快，使分辨率增加。同時，溫度上升，分子熱運動增加，疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。

 

　　4、流動相組成

 

　　流動相的極性越大，溶質(zhì)的分配系數(shù)越大，洗脫時間越短。有機溶劑梯度的大小也會影響分辨率，一般梯度越小。分辨率越大。